<dd id="ls74g"><pre id="ls74g"></pre></dd>
<rp id="ls74g"></rp>

<em id="ls74g"><acronym id="ls74g"></acronym></em>
<tbody id="ls74g"></tbody>

  1. <button id="ls74g"><tr id="ls74g"></tr></button>

  2. 您好!歡迎訪問優利科(上海)生命科學有限公司網站!
    全國服務咨詢熱線:

    15021281375

    當前位置:首頁 > 技術文章 > 細胞復蘇、傳代與凍存操作流程

    細胞復蘇、傳代與凍存操作流程

    發布時間:2023-03-02      點擊次數:238

    細胞復蘇、傳代與凍存操作流程

    儀器與試劑

    儀器

    試劑

    耗材

    離心機

    胎牛血清(FBS

    離心管(15ml、50ml

    生物安全柜

    無菌 1×PBS pH=7.2

    T-25 細胞培養瓶

    電動移液器

    0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

    一次性無菌移液管(2ml、5ml、10ml

    CO2 培養箱

    wan培養基(含血清)

    1.8mL 凍存管

    倒置顯微鏡



    液氮罐


    凍存液:90%FBS+10%DMSO



    異丙醇


    程序降溫盒

    恒溫水浴鍋



    超低溫冰箱



    護目鏡、厚毛線手套等

    操作流程

    復蘇

    1)將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃;

    2

    )準備一支 15ml 離心管,加入 5ml 10%FBS wan全培養基,放入 37℃水浴鍋中預熱;

    3

    )戴上護目鏡,厚毛線手套后,從液氮罐中取出要復蘇的細胞,盡快轉入 37℃恒溫水浴鍋中復溫晃動凍存管以提高復溫速率;

    4

    )將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準中,混勻后,1000rpm 離心 5min;

    5

    )準備一個 T-25 培養瓶,寫上細胞名稱、日期,再加入 4ml wan全備的離心管培養基;

    6

    )離心完成后棄去上清,用 1ml wan全培養基重懸細胞后,轉入 T-25 細胞培養中,混勻后轉入O2 培養箱中培養靜置。



    注意:從液氮中取出細胞凍存管時,若凍存管內有液氮進入,需擰松凍存管,排出內部殘留的液氮,之后擰緊凍存管,置于干冰上,然后放入 37℃水浴中,避免溫差太大造成液氮快速氣化而爆炸。

    傳代

    (細胞傳代建議一傳二)

    1.

    當細胞匯合度達到 85%以上時,可進行傳代。

    2.

    在生物安全柜內,打開培養瓶瓶口,收集瓶內的培養基;

    3.

    向培養瓶內加入 3ml 無菌的 1×PBS  后,水平放置培養瓶,使 PBS 能夠浸潤到培養瓶底面上所有的面積,吸棄 PBS;

    4.

    向瓶內加入消化液 1ml,浸潤底面后放入 37℃ CO2 培養箱中孵育 1~2min;

    5.

    孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起,若全部消化下來則直接向培養瓶內加入2ml 10%FBS 的wan全培養基中,將懸液吸入 15ml 離心管;
    注:如還有部分細胞未消化下來,可采用分步消化:
    準備一個無菌的 15ml 離心管,加入 2ml 10%FBS wan全培養基;
    將消化下來的細胞吸入中的離心管內中和(避免吹打);
    向之前消化的培養瓶中加入 1ml 胰酶繼續消化 2min 左右,輕拍培養瓶,95%左右細胞脫落后加入 2ml 10%FBS 的wan全培養基中和,中和后的細胞懸液移入中的離心管內。
    6.1000rpm 離心 5min;

    7.

    準備兩個新的 T-25 培養瓶,各加入 4ml wan全培養基。

    8.

    離心完成后,棄上清,用 2mlwan全培養基重懸離心細胞,將重懸后的細胞轉入 2 T-25 培養瓶,每個培養瓶各 1ml;

    9.

    水平放置培養瓶,震蕩混勻后,將培養瓶置于 37℃,5%CO2 培養箱中靜置培養。



    凍存

    (細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支)

    1~6

    )參照傳代步驟


    7)離心完成后,棄上清,用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀,然后轉入 1.8ml 凍存管中;

    8)將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫;

    9)第二天,取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,盡快轉入液氮罐中保存。


    優利科(上海)生命科學有限公司
    地址:金大公路8218號1幢
    郵箱:1431486511@qq.com
    傳真:
    關注我們
    歡迎您關注我們的微信公眾號了解更多信息:
    歡迎您關注我們的微信公眾號
    了解更多信息
    亚洲av午夜福利精品一级无码|久久婷婷五月综合97色一本一本|亚洲AV成人片色在线观看网站|在线观看视频极品粉嫩福利
    <dd id="ls74g"><pre id="ls74g"></pre></dd>
    <rp id="ls74g"></rp>

    <em id="ls74g"><acronym id="ls74g"></acronym></em>
    <tbody id="ls74g"></tbody>

    1. <button id="ls74g"><tr id="ls74g"></tr></button>

    2. 掃一掃訪問手機站掃一掃訪問手機站
      訪問手機站