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    果糖(fructose ,FT)含量試劑盒說明書

    發布時間:2023/5/22      點擊次數:41

    果糖fructose ,FT含量試劑盒說明書

                                    微量法100/96

     

       意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

    測定意義:

    果糖是一種最為常見的己酮糖,是葡萄糖的同分異構體,以游離狀態大量存在于水果的漿汁和蜂蜜中,能與葡萄糖結合生成蔗糖。果糖是最甜的單糖,廣泛應用于食品、醫藥、保健品生產中。

     

    測定原理:

    果糖與間苯二酚反應,生成有色物質,在480nm下有特征吸收峰。

     

    所需的儀器和用品:

    可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水

     

    試劑的組成和配制:

    提取液:液體 100ml×1瓶,4保存;

    試劑一:1mg/mL標準液10mL×1瓶,4保存;

    試劑二:液體 25ml×1瓶,4保存;

    試劑三:液體 8ml×1瓶, 4避光保存;

    試劑四:粉劑0.5g×1瓶,常溫保存。

     

    果糖提?。?/span>

    稱取0.1~0.2g樣本,常溫研碎;加入0.5mL提取液,適當研磨后快速轉移到有蓋離心管中;置于80水浴鍋中10min(蓋緊,以防止水分散失),振蕩3~5次,冷卻后,4000g,25℃離心10min,取上清;加入少量(約2mg)試劑四,80脫色30min(蓋緊,以防止水分散失);再加入0.5mL提取液,4000g,25℃離心10min,取上清液測定。

     

    測定步驟:

    分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至480nm,蒸餾水調零。

    1、  樣本測定,(在EP管中依次加入下列試劑):

    試劑(μL

    空白管

    標準管

    測定管

    樣本



    30

    試劑一


    30


    蒸餾水

    30



    試劑二

    210

    210

    210

    試劑三

    60

    60

    60

    混勻,95水浴反應30min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測定480nm處光吸收值,空白管、標準管和測定管分別記為A1、A2A3??瞻坠芎蜆藴使苤灰鲆还?。

     

     

    果糖含量計算:

    1、果糖含量(mg/mg prot=C標準管×V1×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷V1×Cpr= (A3-A1)÷A2-A1) ÷Cpr

    此法需要自行測定蛋白濃度。

    2、果糖含量(mg/g鮮重)=(C標準管×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)= (A3-A1) ÷(A2-A1) ÷W。

    C標準管:標準管濃度,1mg/mL;V1:加入樣本體積,0.03mL;V2:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。

    注意:Z低檢測限為100ng/g鮮重或1ng/mg prot


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